目的:建立可用于检测无创标本尿液中弓形虫DNA的TaqMan实时荧光定量聚合酶链反应(Real - Time-FQ- PCR)并初步评价其临床应用价值.方法:根据登录GenBank的弓形虫B1基因序列,设计1对引物和1条TaqMan探针.提取感染弓形虫小鼠尿液总弓形虫DNA,先用普通PCR扩增目的基因片段,将回收产物与PMD - 18T载体连接.经测序证实为目的片段后,制备系列浓度参照物,优化FQ - Real - Time - PCR反应体系,并对灵敏度、重复性、特异性、线性、探针稳定性进行评价.检测3份外周血全血中弓形虫DNA阳性者的尿样,再作初步临床应用评价.结果:成功构建尿液中弓形虫DNA参照物,灵敏度为弓形虫DNA 104拷贝/ml.批内变异系数(CV)为2.42％,批间CV为4.18％.线性为103～107拷贝/ml,特异性100％.检测3份外周血弓形虫DNA阳性就诊者的尿样,阳性率为100％(3/3).结论:用Real - Time - FQ - PCR能检测小鼠尿液弓形虫DNA和人尿液弓形虫DNA,该方法具有方便、灵敏、特异、结果重复性好等优点.
作者：骆方军；陈建中
来源：中国妇幼保健 2011 年 26卷 28期
