目的探索构建能表达人B型利钠肽(hBNP)的pLenti6/V5-D-TOPO-hBNP载体的方法,以实现人B型利钠肽基因在骨骼肌成肌细胞中长久、稳定的表达.方法将目的基因人B型利钠肽(hBNP)亚克隆到真核细胞表达载体pLenti6/V5-D-TOPO载体上,构建重组质粒pLenti6/V5-D-TOPO-hBNP.将pLenti6/V5-D-TOPO-hBNP及阳性对照质粒pLenti6/V5-D-TOPO-GFP分别用lipo-fectamin 2000介导转染293FT细胞,获得病毒颗粒;用病毒颗粒转染体外培养的SD乳鼠骨骼肌成肌细胞.荧光显微镜下计数确定阳性对照质粒的瞬时转染数,从而估计该基因的瞬时转染效率.加入筛选试剂以获得稳定表达异源B型利钠肽(BNP)的成肌细胞.收集瞬时转染及筛选后的细胞培养基,用酶连结免疫吸附分析(ELISA)检测试剂盒检测人B型利钠肽(hBNP)的表达水平.结果聚合酶链式反应法及DNA测序显示人B型利钠肽基因成功地插入到pLenti6/V5-D-TOPO载体中;阳性对照质粒转染细胞12 h后,在荧光显微镜下观察,其转染效率达60
作者：刘向阳；卢永昕；李小青；刘隽；李爱华；罗萍；朱纪法；李锋
来源：中国分子心脏病学杂志 2005 年 5卷 3期
