目的 运用双分子荧光互朴(bimolecular fluorescence complementation,BiFC)技术探讨氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)介导血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1 (LOX-1)和血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1)之间的相互作用,推测其可能是参加动脉粥样硬化等心血管疾病过程的重要机制之一.方法 将LOX-1与AT1受体质粒共转染COS7细胞,给予ox-LDL(50ug/ml)刺激后,检测细胞中p-ERK表达水平.根据BiFC载体和AT1,LOX-1基因序列设计引物,将AT1、LOX-1基因克隆到BiFC特异性的荧光载体上,得到重组BiFC质粒:phmKGN-MN-AT1,phmKGC-MN-AT和phmKGC-MC-LOX-1,phmKGN-MC-LOX-1,配对共转染HEK293细胞,用ox-LDL(50μg/ml)刺激,研究AT1受体和LOX-1的相互作用;构建G蛋白偶联受体家族中另一蛋白肾上腺素受体β2(β2-adrenergic receptor,β2AR)的BiFC重组质粒:phmKGN-MN-β2AR和phmKGC-MN-β2AR,分别与LOX-1对应的BiFC质粒转染HEK293细胞,ox-LDL(50ug/ml)刺激后,观察细胞荧光.结果 用ox-LDL刺激转染AT1与LOX-1受体质粒的COS7细胞,可以引起p-ERK表达升高；成功构建AT1、LOX-1、β2AR的BiFC重组质粒;将AT1和LOX-1的BiFC质粒共转染HEK293细胞,用ox-LDL刺激后,可以观察到绿色荧光.而转染β2AR和LOX-1的BiFC质粒,用ox-LDL刺激后未检测到荧光.结论 初步验证

作者：葛静怡；龚惠；蒋国良；杨春杰；张国平；邹云增

来源：中国分子心脏病学杂志 2011 年 11卷 4期