目的 比较老年骨质疏松( osteoporosis,OP)和健康成年人椎体中骨髓间充质干细胞( bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)自噬水平和成骨分化能力.方法 取从2组手术患者椎体中培养的BMSCs细胞,Western blot检测自噬相关基因LC3和P62蛋白表达.转染含LC3-GFP质粒的腺病毒后,激光共聚焦下观察代表自噬体的绿色荧光斑点数.细胞经成骨诱导分化培养基刺激后,碱性磷酸酶染色比较早期成骨指标,茜素红染色比较晚期成骨指标钙盐沉积的影响.荧光定量PCR ( q-PCR)检测骨形成相关基因I(collagen type I,COL I)、骨钙素(osteocalcin,OCN)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)以及Runt相关转录因子2 ( RUNX2).结果 Western blot 结果显示 OP 组 BMSCs 的 LC3-II/I 表达明显降低,而 P62 表达明显增高( P ＜0. 05);激光共聚焦观察进一步证实 OP 组中绿色荧光斑点数目显著下降,说明细胞内自噬体数目减少(P ＜0. 05).两组BMSCs经成骨诱导后,茜素红和碱性磷酸酶染色发现OP组阳性程度明显弱于正常对照组,而q-PCR结果显示成骨分化的一些关键指标COL I、OCN、OPN和RUNX2在OP组中均显著下降,差异具有统计学意义(P＜0. 05).结论 骨质疏松的BMSCs中自噬水平较正常细胞低,且成骨分化能力更弱.
作者：徐丽丽；胥方元；万永鲜
来源：中国骨质疏松杂志 2018 年 24卷 11期
