目的:体外构建携带人卵泡抑素基因(FS)cDNA的真核表达载体,并观察其在幼年叙利亚地鼠肾细胞(BHK21)中的表达.方法:从新鲜人卵泡抽提液细胞中提取RNA,应用RT-PCR方法扩增人FS cDNA序列,克隆到pMD-18T载体中,构成pMD-FS重组克隆质粒.经测序鉴定后,双酶切得到人FS基因cDNA序列,插入到真核表达载体pEGFP-N1中,构成pEGFP-FS重组表达质粒.pECFP-FS重组表达质粒经酶切和PCR鉴定,通过脂质体2000介导瞬时转染BHK21细胞,并检测绿色荧光蛋白(GFP)的荧光表达.结果:成功构建pMD-FS重组克隆质粒,FS cDNA序列测序结果与GenBank中公布的序列(Genbank NM_013409.1)同源性为100
作者:莫毅;梁方方;檀大羡;牛向丽;陈自洪;华荣;张海英;谢丹尼
来源:中国计划生育学杂志 2011 年 19卷 4期