目的 探究靶向下调紧密连接蛋白4(Claudin-4)基因表达对膀胱癌细胞DNA损伤修复及其化疗敏感性的影响.方法 采用si-Claudin-4及阴性对照(si-NC)转染人膀胱癌细胞系EJ下调Claudin-4的表达,采用qRT-PCR和Western blot检测细胞Claudin-4的表达,以确定转染效果.不同浓度顺铂(DDP)处理转染后的EJ细胞,CCK-8法检测细胞存活率.将EJ细胞随机分为对照组、si-Claudin-4组、DDP组、DDP+si-Claudin-4组.经转染处理与DDP处理后,CCK-8法检测各组细胞存活率;平板克隆形成实验检测各组细胞克隆形成能力;细胞免疫荧光染色观察各组细胞内γ-H2AX焦点生成情况;单细胞凝胶电泳法检测各组细胞DNA损伤情况;Western blot检测各组细胞内γ-H2AX、Ku70、Ku80以及DNA-PKcs的蛋白表达水平.结果 细胞转染后,si-Claudin-4组细胞内Claudin-4 mRNA和蛋白相对表达量均显著低于对照组和si-NC组(P<0.05).经不同浓度DDP处理后,si-Claudin-4组EJ细胞存活率显著低于对照组和si-NC组(P<0.05).与对照组比较,si-Claudin-4组和DDP组细胞存活率显著下降,细胞克隆形成数目显著减少,细胞内γ-H2AX焦点形成显著增加,细胞出现典型拖尾形状,彗星尾长和尾部DNA比例均显著增加,γ-H2AX蛋白相对表达量显著上调,Ku70、Ku80及DNA-PKcs的蛋白相对表达量显著下调,

作者：艾克帕尔·阿布拉江；崔涛；杜恒

来源：局解手术学杂志 2023 年 32卷 4期