目的构建四环素操纵子(TetO)修饰的恶性疟原虫血型糖蛋白结合蛋白130基因(GBP130)启动子,并探讨TetO插入后对启动子活性影响的位置效应.方法将7个拷贝的TetO(7cot)序列分别克隆入GBP130启动子转录起始点附近的4个位点,上、下游各两个,产生4个衍生质粒pG/7T(-5),pG/7T(-2),pG/7T(+2)和pG/7T(+5).瞬时转染后通过CAT ELISA检测和分析pGBPCAT△2和4个衍生质粒中CAT报告基因的表达水平.结果限制性酶切、PCR扩增和DNA测序证明质粒构建成功.转染和CAT检测表明,7cot插入到GBP130启动子的4个位点中均可提高启动子的活性,并且定位于启动子下游比定位于上游具有更高的活性,其中于+5位点启动子活性最高.结论在疟原虫四环素诱导性转基因表达系统中质粒pG/7T(+5)可作为反应质粒加以应用.
作者：王宪锋；薛采芳；刘忠湘；李珣；李淑梅；雷俊川；缪军
来源：中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2004 年 22卷 2期
