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目的 构建东方巴贝虫(Babesia orientalis)cDNA文库,从中筛选免疫学阳性的克隆. 方法用东方巴贝虫感染牛,提纯红细胞内虫体的总RNA,反转录合成cDNA,PCR扩增后将其连接于噬菌体载体(λTriplEx2),通过体外包装,建成东方巴贝虫cDNA文库,并进行扩增.用兔抗东方巴贝虫的血清筛选cDNA文库,阳性克隆经大肠埃希菌BM25.8自身环化酶将噬菌体重组子λTriplEx2转化为相应的质粒重组子pTriplEx2,PCR鉴定插入片段大小,并测序,用Blast对测序结果进行同源性分析,并对序列编码的氨基酸序列进行结构和功能的预测. 结果未扩增文库的滴度为2.0×106pfu/ml,重组率为98.8

作者:刘琴;周丹娜;周艳琴;张颖;贺兰;姚宝安;赵俊龙

来源:中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2009 年 27卷 3期

知识库介绍

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作者:
刘琴;周丹娜;周艳琴;张颖;贺兰;姚宝安;赵俊龙
来源:
中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2009 年 27卷 3期
标签:
东方巴贝虫 cDNA文库 免疫学筛选 序列分析
目的 构建东方巴贝虫(Babesia orientalis)cDNA文库,从中筛选免疫学阳性的克隆. 方法用东方巴贝虫感染牛,提纯红细胞内虫体的总RNA,反转录合成cDNA,PCR扩增后将其连接于噬菌体载体(λTriplEx2),通过体外包装,建成东方巴贝虫cDNA文库,并进行扩增.用兔抗东方巴贝虫的血清筛选cDNA文库,阳性克隆经大肠埃希菌BM25.8自身环化酶将噬菌体重组子λTriplEx2转化为相应的质粒重组子pTriplEx2,PCR鉴定插入片段大小,并测序,用Blast对测序结果进行同源性分析,并对序列编码的氨基酸序列进行结构和功能的预测. 结果未扩增文库的滴度为2.0×106pfu/ml,重组率为98.8