目的 获取蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia,Gl)沉默信息调节因子2(Sir2)基因序列及其重组蛋白.方法 以蓝氏贾第鞭毛虫中国C2克隆株基因组DNA为模板,PCR扩增GlSir2基因编码序列,将所得片段连接至pMD-19T质粒.转化大肠埃希菌(E.coli)JM109,挑取阳性克隆进行测序.将GlSir2基因插入原核表达载体pET28b,构建表达载体pET28b-GlSir2,转化E.coli BL21(DE3),用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达.十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析重组蛋白的表达情况.收集重组表达产物,用8 mol/L尿素溶解包涵体并收集上清,镍离子亲和层析进行纯化.将纯化产物透析复性,蛋白质印迹(Western blotting)进行免疫学鉴定.结果 获得了蓝氏贾第鞭毛虫中国C2克隆株GlSir2基因编码序列,该序列包含一个1 680 bp的开放阅读框架,可编码559个氨基酸,预测其蛋白的相对分子质量(Mr)约为 62 800.构建表达载体pET28b-GlSir2,经IPTG诱导,重组蛋白以包涵体形式表达.溶解包涵体并经纯化后的目的 蛋白纯度达80
作者：张霞；巨红妹；王云华；李雅杰
来源：中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2011 年 29卷 3期
