[目的]构建人椎间盘髓核细胞(nucleus pulposus cells,NPCs)老化模型,探讨老化NPCs中生长因子的表达差异及其与椎间盘退变(intervertebral disc degeneretion,IDD)的关系.[方法]体外单层培养人正常NPCs系(Scien Cell 4800),连续1∶2传代培养,诱导建立NPCs复制性老化(replication senescence cells,RS)模型;不同浓度双氧水作用于未老化细胞,模拟椎间盘氧化应激微环境,诱导建立应激诱导过早老化(stress induced premature senescence cells,SIPS)模型.细胞衰老β-半乳糖苷酶(senescence-associatedβ-galactosidase,SA-β-gal)染色检测NPCs阳性表达率.流式细胞仪检测G1期细胞比例及细胞凋亡率.CCK-8检测不同代次细胞增殖活性.应用Agilent表达谱芯片初步筛选出正常与老化NPCs中差异性表达的生长因子,实时荧光定量PCR进一步验证所筛选生长因子的表达差异.[结果] NPCs经连续传代、双氧水诱导可分别构建RS模型及SIPS模型.两种老化模型SA-β-Gal阳性表达的细胞比例均高于70％,G1期细胞比例均高于80％,凋亡率均低于10％.Agilent表达谱芯片筛选出的碱性成纤维生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)与血管内皮生长因子a(vascular endothelial growth factor a,VEGF-a)在不同老化模型中,表达差异有统计学意

作者：康新桂；吴小涛；王锋；宋鹏；时睿；蔡峰；闫凯

来源：中国矫形外科杂志 2017 年 25卷 1期