目的：构建针对胰岛素生长因子结合蛋白-2（IGFBP-2）的小干扰RNA（siRNA）表达载体，研究载体介导的RNAi技术对人 U251脑胶质瘤细胞株中IGFBP-2表达的抑制作用。方法根据GenBank提供的IGFBP-2基因（NM-000597）核苷酸序列及siRNA的设计原则，设计合成4对带有BamHⅠ、HindⅢ酶切位点的发夹结构寡核苷酸序列，筛选得到576～594 nt、908～926 nt、938～956 nt 3个19 bp片段靶序列，同时随机组合出一条无关序列，应用限制性内切酶酶切和测序技术鉴定重组克隆。用脂质体介导转染人U251胶质瘤细胞株，采用RT-PCR和Western印迹方法检测细胞IGFBP-2 mRNA和蛋白表达。结果酶切筛选得到4个目的片段的阳性克隆，测序证实重组表达载体中插入序列与设计一致。 RT-PCR和Western印迹检测显示构建的siRNA表达载体可显著降低U251细胞中IGFBP-2 mRNA和蛋白表达水平。结论成功构建载体介导的IGFBP-2靶向 RNA干扰重组体，并能有效抑制U251细胞中IGFBP-2基因的表达。
作者：许淑芬；王英凯；刘磊；孙牧男；马寅芙；方艳秋；谭岩
来源：中国老年学杂志 2014 年 19期
