目的：探讨转染克老素（ KL）基因对成骨细胞活性的影响。方法提取原代骨髓间充质干细胞（ BMSCs）并培养，用倒置显微镜观察BMSCs形态。 BMSCs培养至第三代时做流式鉴定，之后换为诱导培养基培养14～21 d，诱导为成骨细胞，用茜素红染色鉴定是否诱导成功。通过重组腺相关病毒（rAAV）介导小鼠 KL基因转染成骨细胞。实验分为五组：空白对照组（control组），KL转染组（KL组），klotho 转染＋FGFR1抑制剂（BGJ398）组（KL＋BGJ398组），空载体组（rAAV组），空载体＋FGFR1抑制剂（BGJ398）组（rAAV＋BGJ398组）。分组处理72 h后，荧光倒置显微镜观察成骨细胞腺病毒表达情况，RT－PCR检测成骨细胞的 KL mRNA 的表达，ELISA检测上清液 KL 蛋白的含量；RT－PCR检测成骨细胞分泌物：骨钙素（OCN）、骨桥蛋白（OPN）的mRNA表达。结果成功提取原代骨髓间充质干细胞，并且成功向成骨方向诱导。通过 rAAV转染 KL 后，成骨细胞高表达外源性KL蛋白（P＜0．01），并在KL－FGF23－FGFR1通路正常的情况下可显著促进成骨细胞分泌 OCN（P＜0．05），显著抑制成骨细胞分泌 OPN （P＜0．05）。结论 KL可以促进成骨细胞的活力，可能是通过KL－FGF23－FGFR1通路发挥作用。
作者：杨秋晨；马厚勋；李运奎；邓小琴；唐芸；吴平
来源：中国老年学杂志 2015 年 7期
