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目的:构建胎盘生长因子hPlGF-2基因腺病毒载体,探讨hPlGF-2修饰的骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)对SD大鼠皮肤愈合的影响.方法:分离培养SD大鼠BMSCs细胞,PCR法扩增hPlGF-2基因DNA片段,并构建pAdTrack-hPlGF-2重组载体;重组腺病毒pAd/hPlGF-2感染BMSCs后,倒置显微镜观察EGFP表达情况,PCR与Western blot分别检测hPlGF-2 mRNA和蛋白的表达,MTT法检测BMSCs增殖;构建SD大鼠皮肤割伤模型,以创缘注射感染重组腺病毒pAd/hPlGF-2的BMSCs为实验组,以创缘注射生理盐水为对照组,HE染色观察创面病理形态变化,免疫组织化学法检测带EGFP(+)的BMSCs在创面的分布情况.结果:成功构建了腺病毒载体pAdTrack-hPlGF-2,在hPlGF-2基因修饰的BMSCs中检测到了hPlGF-2 mRNA与蛋白的表达,且感染重组腺病毒pAd/hPlGF-2对BMSCs的增殖能力无影响.在大鼠皮肤创面注射hPlGF-2基因修饰的BMSCs后,创面感染程度较轻,愈合速度较快,在创伤后7d和14d观察到EGFP标记的BMSCs出现在创面血管周围和血管内皮处,同时有FⅧ表达.在创伤后7d新生肉芽组织中,bFGF的表达明显增加.结论:hPlGF-2基因修饰的BMSCs能分化为成纤维细胞参与到皮肤创面修复中,并分化为血管内皮细胞参与血管的再生.

作者:陈金逸;陈宗存;饶朗毓;黄亚莲;符茂雄

来源:中国美容医学 2020 年 29卷 10期

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作者:
陈金逸;陈宗存;饶朗毓;黄亚莲;符茂雄
来源:
中国美容医学 2020 年 29卷 10期
标签:
骨髓间充质干细胞 腺病毒载体 重组质粒 胎盘生长因子 基因修饰 创伤愈合
目的:构建胎盘生长因子hPlGF-2基因腺病毒载体,探讨hPlGF-2修饰的骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)对SD大鼠皮肤愈合的影响.方法:分离培养SD大鼠BMSCs细胞,PCR法扩增hPlGF-2基因DNA片段,并构建pAdTrack-hPlGF-2重组载体;重组腺病毒pAd/hPlGF-2感染BMSCs后,倒置显微镜观察EGFP表达情况,PCR与Western blot分别检测hPlGF-2 mRNA和蛋白的表达,MTT法检测BMSCs增殖;构建SD大鼠皮肤割伤模型,以创缘注射感染重组腺病毒pAd/hPlGF-2的BMSCs为实验组,以创缘注射生理盐水为对照组,HE染色观察创面病理形态变化,免疫组织化学法检测带EGFP(+)的BMSCs在创面的分布情况.结果:成功构建了腺病毒载体pAdTrack-hPlGF-2,在hPlGF-2基因修饰的BMSCs中检测到了hPlGF-2 mRNA与蛋白的表达,且感染重组腺病毒pAd/hPlGF-2对BMSCs的增殖能力无影响.在大鼠皮肤创面注射hPlGF-2基因修饰的BMSCs后,创面感染程度较轻,愈合速度较快,在创伤后7d和14d观察到EGFP标记的BMSCs出现在创面血管周围和血管内皮处,同时有FⅧ表达.在创伤后7d新生肉芽组织中,bFGF的表达明显增加.结论:hPlGF-2基因修饰的BMSCs能分化为成纤维细胞参与到皮肤创面修复中,并分化为血管内皮细胞参与血管的再生.