目的:在小鼠肝脏组织中表达人甘露糖结合凝集素(mannose-bindinglectin,MBL).方法:采用PCR方法从pGEMT-MBL质粒中扩增人MBL cDNA序列,克隆入pUC19载体中,限制性酶切鉴定及测序正确后,将MBL cDNA克隆入真核表达载体pcDNA3质粒中,构建成pcDNA3-MBL质粒,经尾静脉大容量快速注射pcDNA3-MBL质粒20μg,8 h后处死小鼠,Western Blot方法检测小鼠肝脏组织和血清中人MBL,免疫组织化学方法检测小鼠肝脏组织中人MBL的表达情况.结果:成功扩增出人MBLcDNA序列并构建克隆载体pUC19-MBL,测序结果正确,成功构建pcDNA3-MBL真核表达载体.小鼠尾静脉注射pcDNA3-MBL质粒后8 h,免疫组化检测证实肝细胞中有人MBL表达,Westem blot方法检测发现血清和肝脏组织中出现人MBL蛋白.结论:真核表达载体pcDNA3-MBL裸质粒DNA静脉注射可以在小鼠肝脏中大量表达人MBL,并分泌入血,为临床纠正先天性低MBL患者的易感染状态提供了新的思路.
作者：金振晓；刘维永；胡军；胡巧侠
来源：中国免疫学杂志 2002 年 18卷 12期
