目的:获取人肝再生增强因子(hALR)阅读框的cDNA及构建其酵母双杂交系统的"诱饵"质粒.方法:利用RT-PCR方法,从人胎肝组织中扩增出一约380 bp的DNA片段,重组入pGBKT7载体中,构建成pGBKT7-hALR,然后研究此重组质粒在酵母AH109中的表达情况并用于筛选人肝cDNA文库.结果:获得的378 bp的DNA序列与文献报道的人ALR序列一致;转化的酵母菌在选择性培养基SD/-Trp上培养65小时,长出约Φ1 mm大小的白色菌落,而在SD/-Trp/-His上不生长;酵母提取液的Western blot分析,证实ALR基因在AH109以融合蛋白的形式表达,并具有免疫活性;初步得到hALR相互作用的阳性克隆.结论:pGBKT7-hALR对宿主菌AH109没有毒性作用,也没有自身激活报告基因,可作为酵母双杂交系统中的"诱饵"质粒.
作者：陈思强；佟明华；孔祥平；姚汝华；易学瑞；潘韵
来源：中国免疫学杂志 2003 年 19卷 3期
