目的:探讨幽门螺杆菌融合蛋白粘附素-霍乱毒素B亚单位(HpaA-CtxB,HCTB)经口服免疫小鼠后,机体产生的免疫应答.方法:用PCR方法扩增HpaA和CtxB两个目的基因片段,将它们分别克隆至pET-32a(+)和pQE-30质粒上,然后同时插入pQE-30表达载体中,构建含双基因的的表达质粒pQE-HCTB,转化E.coli DH5α,经IPTG诱导表达融合蛋白HCTB;Western blot分析其免疫反应性.融合蛋白经镍离子柱纯化后,HCTB和HpaA分别给小鼠灌胃进行免疫, ELISPOT和ELISA分别检测小鼠胃粘膜、派伊尔小结(Peyer′s patches, PP)抗原特异性抗体分泌细胞(ASC),和血清IgG、IgA、小肠粘液sIgA和粪便sIgA.结果:经测序HCTB融合基因片段由1 161 bp组成,为编码387个氨基酸残基的多肽.经SDS-PAGE分析相对分子量(Mr)约为 40 000.可溶性表达占全菌的25
作者：吴利先；杨致邦；林珊珊；刘淼
来源：中国免疫学杂志 2004 年 20卷 5期
