目的:制备纯化杜克雷嗜血杆菌血红蛋白受体(HgbA)及其部分蛋白片段(HgbAF),免疫家兔获得rHgbA和rHgbAF特异性多克隆抗体,用于临床软下疳病原学诊断.方法:采用分子生物学技术克隆HgbA和HgbAF基因,诱导表达并纯化rHgbA和rHgbAF;用rHgbA和rHgbAF免疫家兔制备多克隆抗体,采用Western blot和ELISA方法测定抗体免疫活性;建立杜克雷嗜血杆菌HgbA双抗体夹心ELISA检测系统,对其敏感性、特异性进行初步评价.结果:成功克隆了目的基因,经诱导表达获得纯化杜克雷嗜血杆菌rHgbA及其部分重组蛋白片段;免疫家兔获得rHgbA和rHgbAF特异性抗血清,经饱和硫酸氨盐析后,Western blot实验结果显示其能与rHgbA和rHgbAF特异性结合;建立的杜克雷嗜血杆菌HgbA双抗体夹心ELISA,对杜克雷嗜血杆菌、流感嗜血杆菌及其他7种生殖器溃疡相关的细菌进行检测,发现除杜克雷嗜血杆菌呈现强阳性反应外,其余8种菌均为阴性结果,无交叉反应发生;上述ELISA检测纯化rHgbA灵敏度为1.56 ng/ml,杜克雷嗜血杆菌检测灵敏度为2×105 cfu/ml,脓汁模拟样本中杜克雷嗜血杆菌检测的灵敏度为1×106 cfu/ml.结论:成功制备了杜克雷嗜血杆菌血红蛋白受体及其部分蛋白片段,免疫家兔所获得的多克隆抗体能与杜克雷嗜血杆菌特异性结合,而与流感嗜血杆菌及其他7种生殖器溃
作者：王虹；张辛艳；费军伟；王津；姚伟；郭兆标；段琼；杨瑞馥
来源：中国免疫学杂志 2009 年 25卷 6期
