目的:探讨短发夹状RNA基因沉默补体受体C5aR及抑制LPS诱导的肾脏上皮细胞凋亡的作用效果.方法:构建针对大鼠补体受体C5aR基因编码区的短发夹状RNA(shRNA)真核表达载体质粒pRNAT-U6.1-C5aR shRNA,采用电穿孔的方法转染RK3E细胞,经G418筛选后,形成稳定的表达C5aR shRNA的细胞系.实验分为3组,①正常对照组:未转染的RK3E细胞;②阴性对照组:转染空载体pRNAT-U6.1的RK3E细胞系;③实验组:转染C5aR shRNA 的RK3E细胞系.经脂多糖(LPS)孵育12小时后,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,RT-PCR检测mRNA的表达,γ计数仪测定~(125)I标记的C5a与RK3E的结合情况.结果:与正常对照组和阴性对照组相比,实验组的细胞凋亡率显著降低(P＜0.01),C5aR mRNA水平显著降低(P＜0.01),~(125)I标记的C5a与RK3E结合活性显著下降.结论:针对C5aR的特异性短发夹RNA可以明显引起靶基因的沉默,进而抑制LPS诱导的肾脏上皮细胞凋亡的发生.
作者：陈栋；张艳；李明；尹注增；陈刚；张伟杰；陈实
来源：中国免疫学杂志 2010 年 26卷 2期
