目的:制备并鉴定NSE(Neuron-specific enolase)单克隆抗体,建立可检测NSE蛋白的双抗夹心ELISA方法.方法:用本实验室已表达纯化的NSE融合蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备单克隆抗体.采用WB、IP、IF、IHC等方法对获得的NSE单抗进行鉴定及亚型检测.利用辣根过氧化物酶标记纯化后的NSE单抗,建立一个可检测NSE蛋白的双抗夹心ELISA法.结果:通过分析和鉴定,选定2株可稳定分泌抗NSE抗体的杂交瘤细胞株,效价达4.2×107~6.5×107,亚型为IgG2b.免疫印迹结果显示,该抗体不仅能识别细胞内源NSE蛋白,还能识别分泌到细胞培养上清液中的NSE蛋白,此外还可用于免疫荧光及免疫组化检测.文中所建立的双抗夹心ELISA法,最低检测极限为8.85 ng/ml.结论:成功获得了效价高、灵敏度好及特异性强的NSE单抗,建立了一个双抗体夹心ELISA检测系统,具有良好的临床应用前景.
作者：丁焕弟；林志妙；杨赟；于占娇；龚慧婷；李晓彤
来源：中国免疫学杂志 2012 年 28卷 10期
