目的：构建靶向小鼠TNF-α基因的RNA干扰慢病毒载体，为RNA干扰基因治疗提供基础。方法：设计、合成3组靶向TNF-α基因的特异小干扰RNA （ siRNA）：siRNA1、siRNA2、siRNA3及阴性对照siRNA，体外转染小鼠巨噬细胞株RAW264.7，用real-time PCR和ELISA法检测其对经脂多糖刺激的RAW264.7细胞表达TNF-α、IL-1β、IL-6的影响。筛选出特异且抑制性高的siRNA，根据其序列设计合成寡核苷酸链，构建表达短发卡RNA（ shRNA）的重组慢病毒质粒并测序，经鉴定质粒与包装质粒共转染293 T细胞生产慢病毒颗粒，计算病毒颗粒滴度。结果：①siRNA1、siRNA2、siRNA3组的TNF-αmRNA相对表达量分别为0.24±0.01、0.16±0.02、0.19±0.01，与阴性对照0.95±0.02相比差别均具有统计学意义（ F＝531.3， P＜0.001）；与阴性对照相比，mRNA表达抑制率分别为74.26％、83.09％、79.93％。siRNA1、siRNA2、siRNA3及阴性对照组的IL-1βmRNA或IL-6 mRNA相对表达量之间差别无统计学意义（F＝0.981，P＝0.9807＞0.05；F＝0.739，P＝0.5867＞0.05）。②siRNA1、siRNA2、siRNA3的TNF-α蛋白表达分别为（23.95±1.21）、（17.27±1.46）、（19.07±1.57） ng／ml 与阴性对照的（35.37±2.93）ng／ml相比，差别均具有统计学意义（F＝18.1，

作者：赵颖杰；王吉波；辛苗苗；梁宏达；刘相萍；杨堃；隋爱华

来源：中国免疫学杂志 2014 年 7期