目的：鉴定沙眼衣原体pORF5质粒蛋白的免疫原性，并进一步筛选和确定pORF5质粒蛋白免疫优势片段。方法：以沙眼衣原体D血清型DNA为模板，设计pORF5基因全长和9个不同片段特异引物进行PCR扩增，PCR产物经BamHⅠ、NotⅠ双酶切后插入经同样双酶切的原核表达载体pGEX－6p中，构建pORF5质粒蛋白不同长度片段的原核表达重组体，重组体经PCR和测序鉴定后，转化XL1 Blue大肠杆菌表达10种不同长度的GST融合蛋白；ELISA方法检测pORF5质粒蛋白的免疫原性，Western blot鉴定pORF5质粒蛋白的免疫反应性；ELISA测定10个不同片段与沙眼衣原体生殖道感染患者血清、鼠免疫血清以及抗pORF5单克隆抗体的免疫反应性，鉴定pORF5质粒蛋白免疫优势片段。结果：pORF5质粒蛋白免疫原性强，能刺激机体产生高效价抗体；破坏pORF5质粒蛋白天然空间结构，其免疫反应性基本消失；在ELISA反应中，N端缺失66氨基酸的F6片段的免疫反应强度与pORF5全长基本相似， F2与F3出现较弱的免疫反应，其余片段免疫反应消失。结论：pORF5质粒蛋白为构象依赖性免疫优势抗原，其免疫优势表位和构象表位位于C端，本研究为进一步探讨pORF5质粒蛋白的生物学功能和疫苗的研制提供实验依据。
作者：何战胜；邹燕；粟胜梅；雷文波；李忠玉
来源：中国免疫学杂志 2016 年 1期
