目的:探讨沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)pORF5蛋白对细胞凋亡的影响,并进一步分析其分子机制,为阐明Ct致病机制提供实验依据.方法:pGEX-6p/pORF5重组质粒转化XL1-blue大肠杆菌,IPTG诱导表达GST-pORF5融合蛋白,融合蛋白经谷胱甘肽琼脂糖凝胶4B纯化及蛋白酶切除GST标签后得到pORF5蛋白.用不同浓度的pORF5蛋白刺激HeLa细胞,Western blot 检测不同时间Bax和Bcl-2的表达水平以及PI3K/Akt磷酸化水平,Hoechst 33342及流式细胞技术分析细胞凋亡情况;HeLa细胞经PI3K/Akt特异性抑制剂LY294002预处理1 h后,再用pORF5蛋白刺激24 h,测定细胞凋亡率,并进一步分析凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达水平及PI3K/Akt磷酸化水平.结果:凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达变化与pORF5蛋白浓度呈现一定的浓度和时间依赖性,当pORF5蛋白浓度达10 μg/ml时,Bax表达下调,Bcl-2的表达上调,当升高至15 μg/ml时,Bax和Bcl-2的表达量变化最明显;15 μg/ml的pORF5蛋白刺激HeLa细胞24 h,Bax和Bcl-2表达变化最明显;流式细胞检测结果显示:pORF5蛋白刺激组较TNF-α处理组和未处理组细胞凋亡率分别降低了27.3
作者：卜继常；邹燕；聂倩；雷文波；周洲；陆春雪；陈超群；李忠玉
来源：中国免疫学杂志 2018 年 34卷 3期
