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目的:肽基脯氨酰顺反异构酶1(Pin1)在心血管疾病发病过程中发挥重要作用,本研究检测RNA干扰沉默Pin1对缺氧/复氧诱导的大鼠胚胎心肌细胞H9c2凋亡的影响及机制.方法:体外培养大鼠H9c2细胞,建立缺氧/复氧损伤模型,模拟体内缺血再灌注损伤;RT-qPCR和Western blot法检测Pin1的表达;将细胞分为空白对照组、缺氧/复氧组、缺氧/复氧组+转染Pin1 siRNA组、缺氧/复氧组+转染scramble siRNA组;MTT法测H9c2细胞存活率;用流式细胞术Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡率;用Western blot法检测H9c2细胞Bax和Bcl-2蛋白表达;生化法检测Caspase-3的活性水平.结果:Pin1在缺氧/复氧H9c2细胞中呈现高表达;转染Pin1 siRNA后,Pin1的mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P<0.05);与缺氧/复氧组比较,Pin1 siRNA组的细胞存活率增加,凋亡率降低,Bcl-2蛋白表达升高,Bax蛋白表达降低,Bcl-2/Bax升高,Caspase-3活性降低,差异均有统计学意义(P<0.05).结论:Pin1下调可减少缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡,可能是通过上调Bcl-2,下调Bax蛋白表达,降低Caspase-3活性而发挥作用.

作者:郭红雨;段永珂;何瑞利;程冠昌

来源:中国免疫学杂志 2018 年 34卷 3期

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作者:
郭红雨;段永珂;何瑞利;程冠昌
来源:
中国免疫学杂志 2018 年 34卷 3期
标签:
脯氨酰异构酶1 H9c2细胞 缺氧/复氧 凋亡 Pin1 H9c2 cells Hypoxia/reoxygenation Apoptosis
目的:肽基脯氨酰顺反异构酶1(Pin1)在心血管疾病发病过程中发挥重要作用,本研究检测RNA干扰沉默Pin1对缺氧/复氧诱导的大鼠胚胎心肌细胞H9c2凋亡的影响及机制.方法:体外培养大鼠H9c2细胞,建立缺氧/复氧损伤模型,模拟体内缺血再灌注损伤;RT-qPCR和Western blot法检测Pin1的表达;将细胞分为空白对照组、缺氧/复氧组、缺氧/复氧组+转染Pin1 siRNA组、缺氧/复氧组+转染scramble siRNA组;MTT法测H9c2细胞存活率;用流式细胞术Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡率;用Western blot法检测H9c2细胞Bax和Bcl-2蛋白表达;生化法检测Caspase-3的活性水平.结果:Pin1在缺氧/复氧H9c2细胞中呈现高表达;转染Pin1 siRNA后,Pin1的mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P<0.05);与缺氧/复氧组比较,Pin1 siRNA组的细胞存活率增加,凋亡率降低,Bcl-2蛋白表达升高,Bax蛋白表达降低,Bcl-2/Bax升高,Caspase-3活性降低,差异均有统计学意义(P<0.05).结论:Pin1下调可减少缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡,可能是通过上调Bcl-2,下调Bax蛋白表达,降低Caspase-3活性而发挥作用.