目的:探究GRP78对宫颈癌SiHa细胞生物学行为的影响以及作用机制.方法:采用RNAi技术沉默SiHa细胞中GRP78基因的表达.将针对不同位点设计的siRNA通过脂质体介导分别转染入SiHa细胞,通过免疫印迹法和qRT-PCR分别检测转染前后SiHa细胞GRP78蛋白和GRP78 mRNA的表达.划痕实验检测SiHa细胞的迁移能力;Transwell实验检测SiHa细胞的侵袭能力;免疫印迹法检测上皮间质转化相关蛋白及增殖相关蛋白的表达;流式细胞术检测SiHa细胞的凋亡率.结果:转染后,GRP78 mRNA和GRP78蛋白表达水平均明显降低且GRP78-siRNA1501的沉默效果最显著,基因水平和蛋白水平的检测总体趋势相符合;此外,与空白组和NC-siRNA组相比,GRP78-siRNA1501组SiHa细胞中E-cadherin蛋白表达水平明显增高,N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平明显降低,且增殖相关蛋白P-AKTser473、P-GSK3βser9、Cyclin D1、CDK4表达水平也明显降低;Annexin V-FITC/PI双染结果显示,GRP78-siRNA1501组SiHa细胞的凋亡率明显高于NC-siRNA组.结论:沉默SiHa细胞中GRP78基因,会导致SiHa细胞增殖、侵袭和迁移能力减弱,并促进其凋亡.增殖能力减弱可能与抑制AKT/GSK3β/Cy-clin D1信号通路有关,侵袭和迁移能力减弱可能与抑制上皮间质转化的进程有关.
作者：王妙；任云青
来源：中国免疫学杂志 2021 年 37卷 19期
