目的 构建真核表达载体pEGFP-N1-PLZF,为基因水平研究早幼粒细胞白血病锌指蛋白(PLZF)在精原干细胞增殖和分化中的调控机制提供理论参考.方法 参考分子克隆技术,采用RT-PCR的方法从大鼠睾丸组织中扩增PLZF,将该基因连接克隆到含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的真核表达载体pEGFP-N1上,以构建重组质粒pEGFP-N1-PLZF.结果 实验从大鼠睾丸组织中提取总RNA,以RT-PCR方法获取编码PLZF基因的全序列cDNA.构建PLZF的c DNA真核表达质粒时将能发出绿色荧光的EGFP报告基因融合在PLZF基因,并经酶切后DNA电泳鉴定及DNA测序证实结果.结论 构建重组质粒pEGFP-N1-PLZF成功,实验中将能发出绿色荧光的EGFP报告基因融合在PLZF基因的3'端.提高PLZF在真核细胞中的表达,而且不影响其目的 蛋白的结构和功能,对研究PLZF调控精原干细胞增殖和分化机制具有重要的意义.
作者：夏伟；白杨；曾甫清；王振迪；叶哲伟
来源：中国男科学杂志 2007 年 21卷 8期
