目的 探讨持续活化Akt且带有HA标签(myr-HA-Akt)基因的重组腺病毒在肝硬化大鼠肝脏中的表达特性.方法 酶切正向插入目的 基因的真核表达载体peDNA3.1-myr.HA-Akt,获得myr.HA-Akt cDNA后,将其定向克隆到穿梭质粒pDC316中,然后将重组质粒与病毒骨架质粒pBHGloxAE1,3Cre共转染293细胞,获得复制缺陷型重组腺病毒Ad-myr-HA-Akt,并进行扩增、纯化.通过观察腺病毒感染293细胞后是否出现细胞病变效应;PCR和基因测序方法对所构建病毒进行鉴定,并采用TCID50法检测病毒滴度.自尾静脉注射重组腺病毒Ad-myr-HA-Akt感染肝硬化模型大鼠.免疫印迹法检测大鼠肝组织内Akt和p-Akt蛋白的表达.结果 感染的293细胞出现明显的细胞病变效应,PCR产物电泳证实重组腺病毒的存在,基因测序证实myr-HA-Akt的cDNA正确插入穿梭质粒且与pBHGloxAE1,3Cre正确同源重组;病毒滴度为5.5×1011vp/mL.从蛋白水平证实感染病毒的肝硬化模型大鼠有外源性Akt基因的表达.结论 构建的重组腺病毒Ad-myr-HA-Akt能有效地感染肝硬化模型大鼠,并可在模型大鼠中正确转录和翻译,为进一步研究腺病毒介导的Akt基因对肝硬化的治疗奠定了实验基础.
作者：邓刚；黄飞舟；刘浔阳；罗成群；郭立武
来源：中国普通外科杂志 2008 年 17卷 7期
