目的 建立生长激素促分泌素受体(ghrelin receptor,GHS-R)基因敲除小鼠胚胎干细胞(ES细胞)杂合子模型,为研究GHS-R基因的功能奠定基础.方法 用TK-neo置换原X-pPNT载体的PGK-neo构建目标载体.以小鼠基因组DNA为模板, 用PCR方法扩增2条同源臂,将其按照一定方向装入含有TK-neo的X-pPNT载体,并测序鉴定.载体线性化及纯化后电穿孔转染小鼠ES细胞,用G418和更昔洛韦(Gancyclovir)对电穿孔转染后的ES细胞进行正、负筛选培养,得到双药抗性ES细胞,克隆后抽提基因组DNA,分别用PCR方法鉴定2条同源臂,并测序确定成功同源重组的ES细胞克隆.结果 改建X-pPNT载体成功,PCR获得2条同源臂片段,测序正确,并按一定方向装入打靶载体,ES细胞转染后经双药筛选得到328个阳性ES细胞克隆,PCR及测序鉴定证实3个克隆发生同源重组.结论 本研究成功获得了GHS-R(-/+)杂合子小鼠ES细胞克隆,为进一步通过显微注射及杂交育种获得GHS-R基因敲除小鼠打下了基础.
作者：王维刚；王志刚；张永彦；费俭；郑起
来源：中国普外基础与临床杂志 2008 年 15卷 10期
