目的 应用基因重组技术,构建含胸苷激酶(tk)自杀基因的复制缺陷型腺病毒(ADV-tk),为进一步研究tk自杀基因对肿瘤的抑制作用奠定基础.方法采用细胞内同源重组法构建携带tk基因的ADV-tk,经PCR鉴定正确后进行扩增、纯化和滴度测定.重组腺病毒ADV-tk体外转染人肝癌SMMC-7721细胞,RT-PCR检测tk基因的整合和表达.建立裸鼠人肝癌动物模型,腹腔注射ADV-tk,荧光显微技术观察ADV-tk基因在肝脏的转染情况和对肿瘤细胞的抑制作用.结果 构建的重组腺病毒中带有tk基因,经扩增、纯化后测得重组腺病毒滴度为1.4×1010 pfu/ml.ADV-tk体外转染SMMC-7721细胞后,RT-PCR检测显示tk基因在细胞中整合并且有效表达.体内检测结果发现ADV-tk在肝脏有明显转染,肿瘤组织中凋亡细胞明显增多.结论 本研究构建的携带tk基因的复制缺陷型腺病毒获得成功,可用于下一步研究.
作者：陈耿臻；韩慧；许铭炎；邓小玲
来源：中国普外基础与临床杂志 2010 年 17卷 7期
