目的 构建携带增强绿色荧光蛋白基因的人14-3-3σ真核表达载体pEGFP-GV142-SFN并转染至人乳腺癌MCF-7细胞,鉴定所表达的蛋白活性.方法 通过逆转录-聚合酶链反应从胎脑组织中获得编码14-3-3σ的全长cDNA,定向克隆至真核表达载体GV142中,鉴定正确后与带有增强绿色荧光蛋白的pEGFP-N1-SFN酶切后连接,重组携带14-3-3σ的表达载体pEGFP-GV142-SFN.将pEGFP-GV142-SFN质粒转染至乳腺癌MCF-7细胞,观察荧光蛋白的表达.结果 经限制性内切酶酶切分析、聚合酶链反应和DNA序列测定证实目的 基因已插入重组质粒,荧光显微镜下观察发现:转染24 h后,乳腺癌MCF-7细胞内可见增强绿色荧光蛋白表达,48 h表达最稳定,72 h可见荧光蛋白淬灭,细胞形态逐渐消失.结论 成功构建了14-3-3σ真核表达载体pEGFP-GV142-SFN并转染至乳腺癌MCF-7细胞,观察和检测到绿色荧光蛋白表达.
作者：郝苗；齐凤杰；马玲
来源：中国全科医学 2013 年 16卷 12期
