目的：探讨细胞外 pH 值的变化及其波动对高磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）凋亡的作用及机制。方法2014年11月—2015年3月，选取8～10周龄健康雄性 SD 大鼠6只。采用简单随机抽样法选取2只大鼠，体外分离培养大鼠胸主动脉 VSMCs。采用随机数字表法将 VSMCs 分为 pH 7.4组和高磷组，高磷组又分为pH 6.8＋磷组、pH 7.4＋磷组、pH 7.7＋磷组和 pH 6.8/7.7＋磷组。pH 7.4组采用含10％胎牛血清（FBS）的 DMEM培养基培养。高磷组采用高磷培养基（10 mmol/ L β-甘油磷酸）培养，并根据数字酸度计的读取值酌情加入1 mol/ L HCl 或7.4％ NaHCO3调整 pH 值；pH 6.8/7.7＋磷组第1天给予 pH 7.7刺激、第2天给予 pH 6.8刺激。将剩余4只大鼠按照上述方法培养，重复2次。采用免疫组织化学（SP 法）进行细胞鉴定。采用反转录聚合酶链反应（RT - PCR）法检测半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（ Caspase -3） mRNA 相对表达水平及 B 淋巴细胞瘤2（ Bcl -2） mRNA/ Bcl -2相关 X 蛋白（Bax）mRNA。采流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果倒置相差显微镜下可见：大鼠胸主动脉组织块贴壁3～4 d 后细胞从组织块边缘爬出，细胞为长梭形，呈束状排列；5～6 d 成同心圆状细胞团，形成明显的细胞生长晕，并围绕组织块边缘呈束状、放
作者：崔立文；徐金升；白亚玲；张俊霞；张胜雷
来源：中国全科医学 2015 年 33期
