目的：建立体外稳定过表达酸敏感离子通道1a（ASIC1a）的 Fisher 大鼠甲状腺上皮细胞（FRT 细胞），采用 Ca2＋敏感荧光染料Fura-2/ AM和细胞毒性检测〔乳酸脱氢酶（LDH）释放法〕测定 ASIC1a 活性，探讨高通量筛选ASIC1a 抑制剂的可行性。方法2014年1月—2016年2月，利用分子生物学方法，构建 ASIC1a 过表达载体pcDNA3.1/ myc-His-mASIC1a，通过细胞转染技术建立了稳定过表达 ASIC1a 的 Fisher 大鼠 FRT 细胞。将细胞分成两组，对照组（ FRT 细胞）和实验组（稳定过表达 ASIC1a 的 FRT 细胞），并分别未负载和负载 Ca2＋敏感荧光染料Fura-2/ AM，采用酶标检测仪测定双波长（340 nm 和380 nm）的值，计算 F340/ F380。对照组和实验组细胞经不同 pH值酸液（pH 值7.5、7.0、6.5、6.0、5.5）刺激后，采用酶标检测仪测定450 nm 波长处 LDH 释放量。结果对照组与实验组未负载Fura-2/ AM细胞 F340/ F380比较，差异无统计学意义（ P ＞0.05）；实验组负载Fura-2/ AM细胞 F340/F380较对照组升高（P ＜0.05）；对照组和实验组负载Fura-2/ AM细胞 F340/ F380较未负载Fura-2/ AM细胞升高（P ＜0.05）。pH 值6.5、6.0、5.5时，实验组细胞 LDH 释放量大于对照组（P ＜0.05）；对照组和实验组细胞不同 pH 值时LDH 释放

作者：羿菲；李小曼；白宁；孙威；姜波；张莹；宋晓宇

来源：中国全科医学 2016 年 19卷 17期