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目的 探讨晚期糖基化终末产物(AGEs)调控其受体促进人股动脉平滑肌细胞钙化的机制.方法 2014年1月-2015年3月,将股动脉中膜平滑肌层剪成1~2 mm组织块培养,选取3~8代平滑肌细胞用于实验.将平滑肌细胞分为4组,A组单纯于DMEM培养基中培养,B组于含10 mmol/L β磷酸甘油钠的DMEM培养基中培养,C、D组分别于含10 mmol/L β磷酸甘油钠的DMEM培养基中加入20、40 mg/L AGEs,各组平滑肌细胞干预培养96 h.合成3对随机AGEs受体(RAGE)siRNA,以50 nmol/L转染C组平滑肌细胞,24 h后进行siRNA沉默效果检测,选取转染效率较高的序列用于实验.分别取转染前后平滑肌细胞,采用Von Kossa染色实验观察平滑肌细胞内钙沉积情况,采用Western blotting法检测RAGE、β-catenin、骨保护素(OPG)表达水平.结果 未转染的平滑肌细胞中,A组无钙化斑块形成,B组可见明显的钙化斑块;C、D组细胞质、细胞核呈现粉红色的数量增加,钙化斑块明显增多.经转染后,C组平滑肌细胞细胞质、细胞核呈现粉红色的数量较未转染细胞减少,钙化斑块形成受到抑制.未转染的各组平滑肌细胞RAGE、β-catenin、OPG表达水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05);其中,C组平滑肌细胞RAGE、β-catenin、OPG表达水平高于B组,D组平滑肌细胞RAGE、β-catenin、OPG表达水平高于B、C组

作者:何虎强;曾宏;孙晓磊;张雷;王伟明;胥雄飞;何延政;刘勇

来源:中国全科医学 2017 年 20卷 20期

知识库介绍

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作者:
何虎强;曾宏;孙晓磊;张雷;王伟明;胥雄飞;何延政;刘勇
来源:
中国全科医学 2017 年 20卷 20期
标签:
糖尿病 血管钙化 晚期糖基化终末产物 骨保护素 Diabetes mellitus Vascular calcification Advanced glycation end products Osteoprotegerin
目的 探讨晚期糖基化终末产物(AGEs)调控其受体促进人股动脉平滑肌细胞钙化的机制.方法 2014年1月-2015年3月,将股动脉中膜平滑肌层剪成1~2 mm组织块培养,选取3~8代平滑肌细胞用于实验.将平滑肌细胞分为4组,A组单纯于DMEM培养基中培养,B组于含10 mmol/L β磷酸甘油钠的DMEM培养基中培养,C、D组分别于含10 mmol/L β磷酸甘油钠的DMEM培养基中加入20、40 mg/L AGEs,各组平滑肌细胞干预培养96 h.合成3对随机AGEs受体(RAGE)siRNA,以50 nmol/L转染C组平滑肌细胞,24 h后进行siRNA沉默效果检测,选取转染效率较高的序列用于实验.分别取转染前后平滑肌细胞,采用Von Kossa染色实验观察平滑肌细胞内钙沉积情况,采用Western blotting法检测RAGE、β-catenin、骨保护素(OPG)表达水平.结果 未转染的平滑肌细胞中,A组无钙化斑块形成,B组可见明显的钙化斑块;C、D组细胞质、细胞核呈现粉红色的数量增加,钙化斑块明显增多.经转染后,C组平滑肌细胞细胞质、细胞核呈现粉红色的数量较未转染细胞减少,钙化斑块形成受到抑制.未转染的各组平滑肌细胞RAGE、β-catenin、OPG表达水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05);其中,C组平滑肌细胞RAGE、β-catenin、OPG表达水平高于B组,D组平滑肌细胞RAGE、β-catenin、OPG表达水平高于B、C组