目的 分析PNP-TK融合自杀基因系统及PNP单自杀基因系统对肝癌细胞的杀伤作用及二者对肝癌细胞潜在的杀伤机制. 方法构建融合基因表达载体pcDNA3.0/PNP-TK,经酶切、PCR及测序鉴定重组体,G418筛选获得稳定转染了pcDNA3.0/PNP-TK的HepG2细胞克隆.RT-PCR和Western Blotting检测融合基因在HepG2细胞中的表达.台盼兰排斥法检测细胞的生长曲线,MTT法检测细胞对相应前药的敏感性及分别在一种和两种前药作用下所导致的旁观者效应.结果 融合基因片段PNP-TK正确插入了pcDNA3.0载体中,pcDNA3.0/PNP-TK在肝癌细胞株HepG2中实现了表达.抗性细胞克隆对相应的前药十分敏感.在两种前药的联合作用下,pcDNA3.0/PNP-TK所导致的旁观者效应明显强于只给予MeP-dR一种前药以及pcDNA3.0/PNP单基因系统所致的旁观者效应.结论 具有双自杀基因功能的表达载体pcDNA3.0/PNP-TK对肝癌细胞的杀伤效果优于PNP单自杀基因系统.
作者：周俊立；蔡晓坤；易学锋；王德全；姚振江；周卫平
来源：中国热带医学 2009 年 9卷 8期
