目的 建立检测结核分枝杆菌mRNA表达水平的双重实时RT-PCR反应体系,准确快速鉴定结核分枝杆菌.方法 根据GenBank上已发表的结核分枝杆菌表达85B抗原的fbpB mRNA基因序列,进行对比分析,设计合成fbpB引物和探针,其中探针以CY5为报告基团,BHQ3为淬灭基团.根据WHO文献报道合成人类RNase P基因引物和探针,其中探针以FAM为报告基团,BHQ1为淬灭基团.经条件优化后,建立检测结核分枝杆菌mRNA双重实时RT-PCR方法,在同一体系内同时扩增结核分枝杆菌fbpB基因和人类RNase P基因,通过检测10份肺结核患者痰液和10份健康无症状人群痰液,检验方法的特异性、重复性和检测限性.结果 肺结核患者痰液fbpB和RNase P基因均扩增阳性,健康无症状人群痰液fbpB均无扩展曲线,RNase P均扩增阳性.重复性检测显示fbpB基因重复检测的变异系数在1％以下,fbpB检测CT值与痰涂片抗酸染色分枝杆菌的数量呈良好的相关性.结论 建立了一种快速双重实时RT-PCR方法能同时对结核分枝杆菌fbpB mRNA基因和人类RNase P基因进行检测,在检测fbpBmRNA基因的同时,通过检测RNase P基因监测RNA提取效果和PCR反应扩增效果.
作者：古莉冰；朱玉兰；王佃鹏；董瑞玲；李微；孙杰；刘胜牙
来源：中国热带医学 2012 年 12卷 6期
