目的对恶性疟原虫热休克蛋白基因进行体外扩增，构建HSP86基因打靶载体，利用基因敲除技术进行恶性疟原虫热休克蛋白基因功能的研究。方法恶性疟原虫体外培养，基因组DNA提取，目的基因扩增，载体与目的片段连接、阳性克隆筛选及酶切鉴定。结果经酶切鉴定PCR产物及插入片段大小与预期值相符，进一步测序鉴定证实PCR产物及插入片段为所需目的基因片段。插入片段经酶切鉴定证实插入方向正确。结论成功构建了用于恶性疟原虫基因打靶的插入型及置换型载体(pHCl-HSP86int和pHCl-HSP86rep)，该打靶载体的成功构建为随后将进行的恶性疟原虫细胞内基因转染和进一步的功能研究奠定了基础。
作者：叶苓；余新炳；徐劲
来源：中国人兽共患病杂志 2000 年 16卷 6期
