目的 建立多重16S rDNA PCR方法用以同时检测慢性牙周炎(CP)临床标本中牙龈卟啉单胞菌(Pg)、伴放线放线杆菌(Aa)和齿垢密螺旋体(Td)，并了解不同感染情况与慢性牙周炎严重程度的关系。方法 采集152例CP患者牙周袋标本，并按Hugoson的方法将其分为轻、中和重度三类，另采集30例牙周健康者龈沟标本作为正常对照。上述临床标本置于200μl裂解缓冲液中，100℃冰浴10 min后取10μl上清液直接作为PCR的模板。采用常规酚-氯仿法提取Pg ATCC33277株、Aa Y4株、Td FM株和E.coli DH5α株的DNA分别作为PCR的阳性和阴性对照。采用Pg、Aa和Td 16S rDNA特异性引物，建立多重PCR检测上述标本。3例Pg、Aa和Td PCR结果均阳性患者牙周袋标本目的扩增片段T-A克隆后测序。采用χ2检验分析Pg、Aa和/或Td感染率与牙周炎严重程度之间的关系。结果 所建立的多重16S rDNA PCR最低可检出10个Pg、20个Aa和20个Td细胞。Pg、Aa和Td 16S rDNA扩增片段测序结果与已报道的相应序列比较，相似性分别高达99.45％、97.08％和96.59％。30例牙周健康者龈沟标本中，仅有1例(3.3％)Pg、2例(6.7％)Aa的16S rDNA扩增结果阳性，其余标本均阴性。152例CP患者牙周袋标本中，147例(96.7％)检出Pg、Aa和/或Td的16S rDNA，5例(3.3％)扩增结果均阴性。Pg的
作者：蒋锦琴；孙爱华；阮萍；陈莉丽；严杰
来源：中国人兽共患病杂志 2004 年 20卷 6期
