目的利用毕赤酵母高效表达系统表达用于下游实验的恶性疟原虫AMA-1(Ⅲ)重组蛋白.方法将测序正确的AMA-1(Ⅲ)基因插入毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9k中,用高压电穿孔转化法将目的基因转化入酵母感受态细胞GS115,筛选高拷贝转化子,利用甲醇进行诱导表达.表达产物用SDS-PAGE和免疫印迹进行检测.结果 AMA-1(Ⅲ)蛋白表达于培养上清,蛋白的相对分子质量分别为16.3ku,免疫印迹结果表明AMA-1(Ⅲ)基因表达蛋白能被抗AMA-1(Ⅲ)的单抗所识别,出现特异条带,推算AMA-1(Ⅲ)蛋白的表达量为0.8g/L.结论酵母细胞表达系统可高效表达在构象方面接近天然蛋白的AMA-1(Ⅲ)重组蛋白.
作者：张忠广；赵恒梅；宫玉香
来源：中国人兽共患病杂志 2005 年 21卷 3期
