目的 对人幽门螺杆菌(H.pylori)编码47kDa外膜微孔蛋白基因omp47克隆表达及特性鉴定,探索研制H.pylori疫苗的新途径.方法 培养和收集H.pylori标准菌株NTTC11637及临床菌株,采用酚∶氯仿抽提、纯化基因组DNA.设计上下游引物,并以该基因组为模板,采用聚合酶链反应(PCR)扩增omp47基因片断.将目的基因和与克隆载体PGEM-T连接后,转化至E.coli DH5α及BL21,碱裂解提取质粒经BamHI和XhoI双酶切鉴定并进行序列分析.重组蛋白采用IPTG诱导表达后,经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)鉴定、镍亲和层析纯化检测抗原活性.结果 经酶切、测序分析表明,插入的基因片断为1 284bp,编码427个氨基酸.与GenBank公布的H.pylori标准株26695、43504及J99序列比对,核苷酸同源性高达94
作者：郝渭滨；邵世和；鞠小丽；李良菊；王华
来源：中国人兽共患病学报 2007 年 23卷 8期
