目的 构建甲型H1N1流感病毒HA基因的原核表达质粒,获得融合表达蛋白,并对表达蛋白的免疫反应性进行分析.方法 人工合成A/California/05/2009 H1N1流感病毒的HA基因,以合成基因为模板,通过PCR方法 扩增出去除信号肽的HA部分基因片段,然后将去除信号肽的HA基因克隆至pET30a(+)原核表达载体中,构建出原核表达质粒,再将重组质粒转化E.coli BL21(DE3)表达菌株;重组菌经IPTG诱导后,收集菌体进行SDS-PAGE电泳分析,Western blot分析表达产物的免疫反应性.结果 获得了HA基因的原核表达重组菌,细菌经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE分析可见约67.4 ku大小的目的 蛋白表达条带,Western blot结果 显示,表达产物与人甲型H1N1流感患者阳性血清具有反应性.结论 成功表达出甲型H1N1流感病毒的HA蛋白,该蛋白具有良好的免疫反应性,为甲型H1N1流感的快速诊断方法 的建立提供了生物材料.
作者：马全刚；潘志明；游猛；黄金林；耿士忠；李晓波；顾健；焦新安
来源：中国人兽共患病学报 2010 年 26卷 10期
