目的 制备抗狂犬病病毒N蛋白单克隆抗体,为建立快速准确的狂犬病病毒抗原检测方法奠定基础.方法 将狂犬病病毒Flury LEP株N基因克隆至pGEX-6P-1表达载体中,将纯化后的pGEX-6P-1-RV-N蛋白免疫BAIB/c小鼠3次.取小鼠脾脏细胞和SP2/0细胞融合后,用pET-32a -RV-N重组蛋白作为筛选抗原,经3次亚克隆筛选后得到1D9、2B6、3C5、6B5及5F2 5株单克隆抗体细胞株.亚类鉴定结果表明,其中lD9、2B6、6B5 3株亚类为IgG1,3C5、5F2的亚类为IgM.间接ELISA方法检测2B6单抗细胞腹水效价可达1∶106.经Protein G亲和层析柱纯化和脱盐后可得到浓度为2.5 mg/mL的高纯度的单克隆抗体.其免疫荧光试验结果表明5株单克隆抗体均能特异地与狂犬病病毒结合.结论 制备的单抗具有良好的特异性和敏感性,为后期诊断方法的建立奠定了基础.
作者：曾妮；宫苗苗；程朝飞；黄华欣；郭李平；李刚
来源：中国人兽共患病学报 2011 年 27卷 10期
