目的 对1例输入性疑似疟疾患者的血样进行实验室检测.方法 制备疑似疟疾患者血样的血涂片,吉姆萨染色后进行疟原虫的镜检观察.利用实验室自行研制的疟原虫属特异性(通用型)和4种疟原虫种特异性的巢式PCR和实时荧光PCR检测方法,对该血样进行疟疾检测及分型.将PCR扩增片段进行序列测定,并与已知的卵形疟序列进行blast比对分析.结合血样的分子生物学检测结果,重新对镜检结果进行复核.结果 血样初次镜检为疟疾阴性.使用疟原虫巢式PCR通用引物对血样的DNA进行PCR检测,扩增出了预期大小约240bp的条带；巢式PCR分型检测表明,血样仅扩增出预期大小约450bp的卵形疟条带,无对应大小的恶性疟、间日疟和三日疟扩增条带产生.疟原虫通用型和卵形疟特异性的荧光PCR检测结果均为典型的S形阳性曲线,卵形疟扩增片段的熔解温度为72.5℃.序列分析表明,扩增片段长度为434bp,blast比对发现去除引物后的393个碱基与GenBank DQ845247等卵形疟的SSU rRNA对应部分的基因序列同源性为100％.重新对血涂片进行镜检复核,结果在薄血膜中发现了卵形疟的环状滋养体,被寄生的红细胞为椭圆形,边缘呈伞矢状.结论 使用巢式PCR、实时荧光PCR、序列分析和镜检等方法,证实该例输入性的疑似疟疾患者为卵形疟原虫感染.
作者：师永霞；黄吉城；苏锦坤；李小波；幸芦琴；郑夔；洪烨；郭波旋
来源：中国人兽共患病学报 2011 年 27卷 10期
