目的 构建弓形虫蛋白激酶C受体1基因的pET-30a(+)-RACK1重组质粒,表达、纯化RACK1蛋白.方法 PCR扩增RACK1基因的cDNA序列,用SacI、NcoI限制性内切酶对RACK1基因的PCR产物及pET-30a(+)质粒进行双酶切,连接,转化大肠杆菌BL21,构建重组质粒.IPTG诱导表达,亲和层析柱纯化表达产物,SDS-PAGE 和 Western blotting对表达产物进行分析鉴定.结果 PCR扩增出966 bp的RACK1完整基因序列,成功构建RACK1基因的pET-30a(+)-RACK1重组质粒,表达出约36 kDa的RACK1蛋白,蛋白具有抗原性.结论 成功构建弓形虫RACK1基因的pET-30a(+)-RACK1重组质粒,纯化出RACK1蛋白,为进一步进行RACK1蛋白在弓形虫入侵分子机制中的作用研究奠定基础.
作者：侯俊然；何霭；李卓雅；詹希美
来源：中国人兽共患病学报 2014 年 30卷 3期
