目的 建立检测隐孢子虫的夹心 ELISA方法.方法 本试验以纯化的抗隐孢子虫 IgG、IgY分别作为包被抗体和捕获抗体,棋盘滴定法确定夹心 ELISA的最适工作条件.用基于18SrRNA的PCR方法评估饱和蔗糖溶液、饱和食盐水漂浮和PBST洗涤剂洗涤3种方法预处理样品对夹心 ELISA检测效果的影响.结果 建立的夹心 ELISA 捕获抗体、抗原、检测抗体、酶标二抗最佳工作浓度分别是1:800、2.5 μg/mL、1:100和1:5000,最适捕获抗体包被、抗原抗体反应、酶标二抗反应条件分别为37 ℃作用1 h后4 ℃过夜、37 ℃作用30 min、45 min;最适终止条件是2 mol/L H2SO4,50 μL/孔;TMB室温显色10 min;特异性试验结果显示仅可以检出隐孢子虫抗原,而与常见肠道寄生的球虫卵囊、圆线虫和蛔虫虫卵无交叉反应.批间和批内变异系数均小于10
作者：张璐；刘珍珍；陈凯丽；王荣军；张龙现；宁长申；菅复春
来源：中国人兽共患病学报 2018 年 34卷 3期
