目的 研究结核分枝杆菌抗原Rv3619c(EsxV)黏膜免疫小鼠诱导的免疫应答水平.方法 PCR法扩增eszV基因克隆入原核表达载体pET28a(+),获得的重组E.coli诱导表达目的蛋白,SDS-PAGE电泳和Western Blot鉴定蛋白的表达,亲和层析法纯化EsxV蛋白.以EsxV和/或联合环二腺苷酸(c-di-AMP)经鼻黏膜免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测小鼠特异性抗体水平及亚类,MTS法检测脾细胞增殖,qRT-PCR检测脾和肺脏细胞因子表达水平,ELISA法检测脾细胞因子分泌水平.结果 成功构建EsxV的原核表达载体pET28a(+)-eszV并诱导表达目的蛋白,亲和层析法获得了纯化的重组Es-xV 蛋白.EsxV经黏膜免疫可诱导显著的体液免疫应答,但诱导的细胞免疫应答水平不高.EsxV与c-di-AMP经黏膜接种可诱导特异性IgG水平增加,EsxV蛋白特异的脾细胞增殖,脾和肺细胞的IFN-y转录增加.c-di-AMP显著提高EsxV特异的IFN-y、IL-2、IL-10和IL-17细胞因子分泌,而不诱导炎症因子TNF-α和IL-6表达.结论 EsxV与c-di-AMP佐剂构建的亚单位疫苗可诱导特异性体液和细胞免疫应答,可进一步用于新型结核病亚单位疫苗的研制.
作者：白鹭；宁唤唤；康健；梁璇；谢燕玲；彭钰君；张婧瑶；路延之；柏银兰
来源：中国人兽共患病学报 2022 年 38卷 5期
