目的：构建原核表达载体pET30a（＋）－VH－mms13，诱导表达后鉴定融合蛋白表达。方法分别扩增单克隆抗体基因的重链可变区VH基因和细菌磁小体膜蛋白基因mms13基因，采用重叠延伸PCR技术（splicing by overlap extension ，SOE－PCR）构建融合基因VH－linker－mms13，并将融合基因插入pET30a（＋）载体，酶切、测序验证；将重组质粒导入大肠杆菌DE3中，0．4 mmol／L异丙基疏代半乳糖苷（ Isopropyl β－D－thiogalactoside ，IPTG）诱导表达，产物经SDS－PAGE电泳和Western blot 双重鉴定。结果 PCR鉴定构建的融合基因VH－mms13大小为738 bp，与理论值相符，测序结果表明序列无误；转入DE3经IPTG诱导，在包含体中检测到融合蛋白表达；Western blot结果显示该表达蛋白可与His－tag抗体特异性结合，蛋白大小符合融合蛋白理论预期。结论成功构建了融合基因VH－mms13的表达载体pET30a（＋）－VH－mms13，且融合蛋白反应原性良好，为生物磁靶向药物的研发奠定了基础。
作者：杨柳青；孔登；王雪耘；王晓红；孟丽；王小柯
来源：中国生化药物杂志 2015 年 12期
