目的 探讨丙型肝炎病毒(Hepatitis C Virus,HCV)核心抗原core基因上的G4-四链体(core G4)RNA结构对机体特异性免疫应答的影响.方法 圆二色谱(circular dichroism,CD)检测寡核苷酸链RNA G4(命名为G4R)和突变体G4M(命名为G4RM,在不改变氨基酸密码子的情况下)的G-四链体空间结构;在不改变密码子的情况下采用PCR定点突变的方法把HCV野生型G4-core(DNA)突变为G4M-core,然后将G4-core和G4M-core基因构建至真核表达质粒pcDNA3.1上(分别称为pG4和pG4M),免疫印迹(Western blot)分析core基因上G4结构突变后Core蛋白的表达水平.将pG4及pG4M质粒分别用基因导入仪免疫小鼠,检测免疫后小鼠的细胞免疫以及体液免疫水平.结果 CD结果显示寡核苷酸链RNA G4M相比野生型RNA G4结构发生改变,熔解曲线表明G4RM熔解温度低于野生型RNA G4R.Western blot显示在细胞水平及动物水平,pG4M比pG4的Core蛋白表达水平更高(P<0.05).动物免疫实验结果表明pG4M免疫后小鼠总IgG及IFN-γ的释放水平增高(P<0.05).其中,pG4M免疫组小鼠的IgG水平是pG4组的1.61倍.酶联免疫斑点(Enzyme-linked immunospot,ELISpot)实验中,pG4M免疫后小鼠脾脏细胞IFN-γ的释放水平是pG4的1.39倍.流式实验显示pG4M免疫后小鼠脾脏CD4+T细胞中IFN-γ产生水平是pG4的1.79

作者：王昱斌；卞文秀；刘敏；章晓联

来源：中国生化药物杂志 2017 年 37卷 1期