为了探讨降低mRNA差异显示技术假阳性率的方法,进一步提高此技术的可靠性,提取了手术切除肝癌及非癌肝组织成对标本的总RNA,逆转录获得cDNA片段,以mRNA差异显示方法筛选差异表达基因,选取较明显的一条差异表达条带,行进一步PCR扩增.分别对PCR产物及其经TA克隆后随机挑选的6个单克隆质粒DNA进行序列分析,并通过GenBank/BLAST数据库进行序列的同源性比较,以Northern杂交予以来源确认.自720余条扩增条带中共选出28条差异条带.序列分析及同源性比较表明,所选择条带的PCR产物为一可能的新基因片段;而随机选择的6个TA克隆质粒DNA中,有4个为同一已知基因片段,一个为另一已知基因片段,一个为一可能的新基因片段.同源性比较表明,PCR产物直接测序所得序列与TA克隆质粒DNA的6个片段不具同源性.结果表明,mRNA差异显示条带可能由1条以上分子量相似的片段构成,直接对PCR产物行序列分析并以其为探针进行Northern杂交,是导致出现假阳性片段的原因之一.将PCR产物进行TA克隆,对单克隆质粒DNA进行序列分析并以其为探针进行Northern杂交,可能是解决此问题的一种较好方法.
作者：郝纯毅；赵敏；李勇；邢宝才；吕有勇；黄信孚
来源：中国生物化学与分子生物学报 2002 年 18卷 1期
