采用点突变技术构建了带6×His、Tat和Flag多个标记的pET-HTF的质粒载体,利用基因重组技术构建pET-HTF-EGFP融合蛋白载体.酶切和DNA测序证明,所构建的pET-HTF和pET-HTF-EGFP载体正确.BL21(DE3)表达融合蛋白,用Ni2+分离柱纯化His-Tat-Flag-EGFP蛋白,并加入培养的NIH3T3细胞.荧光显微镜观察显示,His-Tat-Flag-EGFP融合蛋白进入细胞.带His、Tat和Flag标记的质粒载体pET-14b-HTF表达的融合蛋白能够进入细胞,该载体为进行蛋白质功能研究和基因治疗研究提供了一个重要工具.
作者:孙学刚;宋革;刘靖华;李红乐;邢飞跃;张丽华;秦清和;姜勇
来源:中国生物化学与分子生物学报 2003 年 19卷 3期