缺氧诱导丝裂原因子(hypoxia-induced mitogenic factor,HIMF)是一种肺组织特异性生长因子,可刺激肺细胞增生和再生.但HIMF基因表达调控的机制尚未明确.为探索HIMF基因转录调控机制,首先以小鼠基因组DNA为模板,通过PCR扩增方法获得-348～+61 bp、-302～+61 bp、-131～+61 bp、-68～+61 bp的HIMF启动子片段,再将其定向克隆入pGI3-Basic载体,构建荧光素酶报告基因栽体,并制备转录因子ETS-1结合位点的突变或缺失体.在阳离子脂质体的介导下,报告基因载体分别瞬时转染正常氧浓度条件下培养的小鼠肺上皮MLE-12和MLE-15细胞、结肠癌CT26细胞.结果发现,各HIMF启动子片段在MLE-12、MLE-15细胞中均有活性,但在CT26细胞中活性缺失;-302～-131 bp区存在HIMF启动子的核心调控元件.针时该区域ETS-1转录因子结合位点进行突变或缺失,能导致HIMF启动子活性显著降低;凝胶电泳迁移率实验表明,该区段能结合ETS-1.结果提示,转录因子ETS-1参与正常氧浓度下HIMF启动子活性的调控,为研究HIMF基因的转录调控机制奠定了实验基础.
作者：郑丽端；童强松；蔡嘉斌；蒋国松；刘媛；杜志勇；董继华
来源：中国生物化学与分子生物学报 2008 年 24卷 8期
