目的建立人肝细胞生长因子α链(rhHGFα)高效原核表达体系.方法以pRC/CMV-hHGF为模板,扩增hHGFα cDNA,继以XhoI酶切为386和954 bp 2个片段,亚克隆入pBSKS,DNA测序后,将上述两个片段与pBV220连接,构建重组质粒.转化E.coli JM109、DH5α和BL21(DE3),筛选高效表达菌株.分离包涵体,8 mol/L尿素溶解,梯度复性后利用反相和凝胶过滤层析纯化重组蛋白,经MTT法检测活性.结果所克隆的hHGFα基因序列正确,筛选出高效表达菌株BY,经SDS-PAGE显示在相对分子质量52 000处出现特异的目的蛋白表达带,表达量约占全菌蛋白的25
作者：杨利军；杨涛；牛勃；程牛亮；王惠珍；赵建滨
来源：中国生物制品学杂志 2005 年 18卷 1期
